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            1. 技術文章/ARTICLES

              首頁   >    技術文章   >   利用血管緊張素I的提取比較傳統SPE柱與磁性萃取劑的性能

              利用血管緊張素I的提取比較傳統SPE柱與磁性萃取劑的性能

              點擊次數:423  發布時間:2021-07-27

              利用血管緊張素I的提取比較傳統SPE柱與磁性萃取劑的性能

              關鍵詞

              血管緊張素I,液相色譜質譜,固相萃取,Angiotensin I,Ang I,Renin,LC-MS/MS,SPE

              前言

              血管緊張素IAng I)是較為常見的臨檢標志物之一,通過對血管緊張素I提取效果的測試,能夠有效地評價各種樣品前處理手段的臨床適用性和技術性能。

              本文通過對比市售的某有名的進口品牌HLB 96SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取劑提取Ang I試驗的各項方法學指標,直觀地比較了兩者的性能表現。也為臨床SPE樣品前處理技術的發展前景提供了非常有價值的參考。

              實驗設計

              如下表所示,使用1% BSA制備四個濃度水平的Ang I系列標準溶液,輔以穩定同位素標記的Ang I內標。

              Ang I

              濃度(ng

              內標濃度(ng

              LOQ

              0.5

              10

              低水平(L

              7.5

              10

              中水平(M

              30

              10

              高水平(H

              80

              10

              設定如下條件的SPE,應用于某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板。使用適配的正壓96SPE操作裝置運行樣品。

              名稱

              操作

              活化

              使用500 μL甲醇活化SPE板兩次

              平衡

              使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板兩次

              上樣

              500 μL LOQ、低(L)、中(M)、高(H)上樣

              淋洗1

              使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板兩次

              淋洗2

              使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板兩次

              洗脫

              每孔各加入250 μL甲醇,收集洗脫液于96孔板中

               

                                                                                               2.png

              與此對應的,為AUTO M32全自動萃取儀設定如下的程序運行樣品,每個樣品使用2mg HLB磁性萃取劑。

              指令

              溶液

              孔位

              溶劑量(μL

              活化

              甲醇

              1

              500

              平衡

              5%甲酸水溶液

              2

              500

              上樣

              樣品溶液

              3

              500

              淋洗1

              5%甲酸水溶液

              4

              500

              淋洗2

              20%甲醇水溶液

              5

              500

              洗脫

              甲醇

              6

              250

              排廢

              /

              2

              600

               

              3.png

               

              數據和比較

              將實驗設計中所述的四個標準樣本,每個樣品重復三次提取,比較兩種前處理方法提取后,在LC-MS/MS上測得的相對標準偏差,結果如下圖所示。其中,左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的測定結果,右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。

               

              4.png

               

               

              5.png

               

               

              b,低水平(L)重現性

               

              6.png

               

               

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              可以看到,兩種前處理方法無論在外表峰面積、內標峰面積、計算濃度上的相對標準偏差均沒有顯著的差別,但是磁性萃取劑的結果在大多數水平下都略好于傳統的96SPE多孔板。

              在提取率的比較中,我們選擇某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后測得的峰面積為基準(100%),以磁性萃取劑提取后測得的峰面積與之比較。如下圖所示,左側藍色柱為使用某著名進口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的測定結果,右側橙色柱為使用磁性萃取劑提取后的測定結果。

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              最后如下圖展示的LOQ水平兩種方法提取后,在LC-MS/MS所得的MRM色譜圖。圖a為使用傳統的96位SPE多孔板所得色譜圖,圖b為磁性萃取劑所得色譜圖??梢钥吹?,在所有濃度水平下,磁性萃取劑提取測得峰面積均顯著地好于傳統的96SPE多孔板,且均超過后者50%以上,最高甚至達到了約1.8倍。

               

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              結果討論
              明顯地,在LOQ水平下,磁性萃取劑提取得到的色譜峰高超過了傳統的96SPE多孔板提取,這與提取率結果是完全一致的。

              通過上述數據比較,我們可以得到如下表所述的結果。

               

              絕對重復性

              相對重復性

              提取率

              LOQ質量

              操作模式

              某著名進口品牌96SPE多孔板

              較佳

              較佳

              適中

              適中

              手動+負壓裝置

              磁性萃取劑

              較佳

              較佳

              50%以上

              較佳

              少量手動+自動設備

              均優于某著名進口品牌的HLB 96SPE多孔板。同時,AUTO M32全自動提取儀固有的“一次移液”和“無人值守”操作模式,降低了樣品前處理中的人為參與,同時大幅提高了自動化水平。

               

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